Анализы. Полный медицинский справочник. Ключевые лабораторные исследования в одной книге - [37]

11. Рабочий калибровочный раствор мочевой кислоты, 0,03 ммоль/л: 1 мл основного калибровочного раствора доводят до 200 мл водой. Стабилен в течение 2 недель при хранении в холодильнике.

Ход определения

Опытная проба: к 8 мл воды добавляют 1 мл сыворотки, 0,5 мл 0,35 моль/л серной кислоты и перемешивают. Затем добавляют 0,5 мл раствора вольфрамовокислого натрия и тщательно перемешивают. Через 5–10 мин фильтруют. К 3 мл фильтрата добавляют 1,5 мл раствора натрия карбоната, перемешивают. Затем добавляют 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива, перемешивают, переворачивая пробирку. Через 30 мин измеряют в кювете с толщиной слоя в 1 см при длине волны 590–700 нм (красный светофильтр) против холостой пробы. Холостую пробу ставят так же, как опытную, но вместо фильтрата берут 3 мл воды.

Расчет ведут по формуле при сравнении с калибровочной пробой. Калибровочную пробу ставят и измеряют так же, как опытную, но вместо фильтрата берут 3 мл рабочего калибровочного раствора.

Концентрация мочевой кислоты, ммоль/л:

Е_оп/ Е_к× С_к× 10,

где Е_оп – экстинкция опытной пробы;

Е_к – экстинкция калибровочной пробы;

С_к – концентрация рабочего калибровочного раствора, 0,03 ммоль/л;

10 – пересчет на объем сыворотки (в опытную пробу берут 0,3 мл, т. е. в 10 раз меньше, чем в калибровочную пробу).

Клинико-диагностическое значение

Исследование содержания мочевой кислоты в сыворотке крови имеет значение для диагностики начальных стадий поражения почек и подагры.

Считают, что при поражении клубочков почки (острый и хронический нефрит, первично– и вторично-сморщенная почка) в первую очередь страдает выделение мочевой кислоты и индикана, вследствие чего наблюдается гиперурикемия. При очаговых нефритах и нефрозах выделение мочевой кислоты не нарушается.

При подагре наблюдается нарушение обмена нуклеопротеидов, вызывающее отложение солей мочевой кислоты в суставах и различных тканях тела.

Много мочевой кислоты определяется в крови и моче при патологических состояниях, связанных с усиленным распадом нуклеопротеидов: лейкозах, лейкемии, после облучения рентгеновскими лучами, лейкопении, полицитемии, эритремии, гемолитической желтухе, злокачественной анемии в стадии ремиссии, злокачественных новообразованиях, а также при сердечной и печеночной недостаточности, диабете, голодании, усиленном потреблении жирной пищи, аллергии, гипертрофии предстательной железы, илеусе, артрите, ацидозе, пневмонии в стадии резорбции, отравлении свинцом и угарным газом.

Снижение содержания кислоты в сыворотке крови отмечается при анемии, после приема пиперазина, атофана, салицилатов и АКТГ.

Методы исследования пигментного обмена

В основе образования билирубина лежит деградация гема гемоглобина и других гемсодержащих белков и ферментов. Гем распадается до биливердина, который восстанавливается в билирубин.

Свободный билирубин токсичен, не растворяются в воде и циркулирует в крови в комплексе с альбуминами. Этот билирубин дает непрямую реакцию Ван ден Берга (после осаждения альбуминов спиртом), поэтому называется непрямым.

Непрямой билирубин, будучи связанным с альбуминами, не проходит через неповрежденные мембраны почечных клубочков и не фильтруется в мочу.

Выведение билирубина осуществляется с желчью через кишечник. Билирубин, связанный с альбуминами, доставляется кровью в печень. Билирубин легко проникает через мембраны гепатоцитов, альбумины остаются в кровотоке.

В гепатоцитах билирубин подвергается конъюгации с глюкуроновой кислотой, превращаясь в билирубинмоно– и диглюкуронид.

Образованные билирубинглюкурониды нетоксичны, легко растворимы. Они направляются с желчью в кишечник для выведения из организма.

Из кишечника билирубинглюкурониды частично поступают в кровоток и, находясь в крови, представляют собой фракцию прямого билирубин, который дает прямую реакцию Ван ден Берга. Прямой билирубин в отличие от непрямого легко проникает через почечные фильтры и может выделяться с мочой.

В физиологических условиях сыворотка крови содержит примерно 25% прямого билирубина (связанного с глюкуроновой кислотой) и 75% непрямого билирубина (альбумин-билирубина).

Таким образом, общий билирубин крови представляет собой суммарное количество непрямого и прямого билирубина.

У здоровых людей в сыворотке крови содержится: общего билирубина 3,4–20,5 мкмоль/л; прямого (конъюгированного) – 0,86–5,3 мкмоль/л; непрямого (свободного) – 1,7–17,1 мкмоль/л.

Для определения билирубина используется колориметрический метод, основу которого составляет реакция Ван ден Берга. Реакция протекает в 2 стадии: на первой под воздействием соляной кислоты разрывается тетрапирроловая цепь, в результате чего образуются два дипиррола, на второй – оба дипирроловых производных диазотируются диазофенилсульфоновой кислотой с превращением их в азобилирубин. Фракционное содержание билирубина определяется с помощью модифицированного метода Ван ден Берга, предложенного Ендрассиком. Метод принят в качестве унифицированного.

Принцип метода Ван ден Берга

Билирубин вступает в реакцию азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора азокрасителя. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию билирубина и выявляется фотометрически.