Проблемы лечебного голодания. Клинико-экспериментальные исследования - [173]

В целом же вопрос о влиянии сдвигов метаболизма при различных состояниях организма на хромосомный аппарат остается малоизученным.

Настоящее исследование посвящено изучению влияния полного голодания, применяемого с лечебной целью (по методу проф. Ю. С. Николаева) (8) на хромосомы лейкоцитов (лимфоцитов) периферической крови людей. Цитогенетически было обследовано 15 больных. Были -исследованы лимфоциты периферической крови, взятые от 9 больных в возрасте от 19 до 50 лет. Сроки голодания варьировали от 9 до 30 дней. Были также исследованы хромосомные наборы от 6 больных в различные сроки после окончания голодания.

МЕТОДИКА

Лейкоциты (лимфоциты) культивировались in vitro по методике Хангерфорда (21). Согласно этой методике 6 капель крови добавляется в питательную среду (6 мл среды Игла, 1 мл сыворотки АВ IV, 1 капля гепарина, 0,1 мл фитогемагглютиннна (фирмы Уилкон). Культуры инкубируются 72 часа. За 3 часа до окончания культивирования вводится колхицин до конечной концентрации 0,5 гамма на 1 мл культуральной среды. Гипотоническая обработка 0,075 М хлористым калием 10 мин. Фиксация метанолом с ледяной уксусной кислотой (3: 1). Суспензия фиксированных клеток накапывается на влажные предметные стекла, смоченные дистилированной водой с детергентом (препарат «агепон» из ФРГ илн 0,5% раствор моющего средства «Новость»). Окраска производится красителем Романовского-Гимза.

Окрашенные препараты исследуются под микроскопом. Для анализа отбираются метафазные пластинки с хромосомами умеренной спирализации и с минимальным числом наложений. Учитываются хроматидные и хромосомные разрывы, полиплоидные клетки, частота анеуплодиных клеток и частота клеток с ассоциациями акроцентрическнх хромосом.

Результаты анализа представлены на таблицах 1—4.

Таблица 1

Количество клеток с разрывами хромосом и полиплоидные клетки в различные сроки голодания

Таблица 2

Количество клеток с разрывами хромосом и полиплоидные клетки в различные сроки восстановительного периода

Как видно из таблиц 1—2, количество клеток с разрывами хромосом не превышает 3%. Следует подчеркнуть, что по мнению большинства исследователей в норме частота клеток с разрывами хромосом колеблется от 0 до 5%. Что касается частоты анеуплоидных клеток, то она, согласно полученным нами данным, имеет некоторую тенденцию к увеличению только у больных, голодавших продолжительное время (см. таблицу 3, больные Дз-в, По-в, Гр-ч — 25—28—30 дней голодания). Однако частота анеуплоидных клеток увеличивается лишь за счет гипоплоидных клеток.

Таблица 3

Количество анеуплоидиых клеток в различные сроки голодания

Таблица 4

Количество клеток с ассоциациями акроцентрических хромосом в различные сроки голодания

Наиболее вероятно, что этот феномен представляет собой так называемую «артефактную анеуплоидию», связанную с особенностями технических процедур.

Частота полиплоидных клеток во всех-наших исследованиях оказалась также не увеличенной. Равным образом количество клеток с ассоциациями (табл. 4) при голодании и последующем питании оставалось в пределах нормы (10). В качестве иллюстраций приводим кариотипы больных в различные сроки голодания и питания (рис. 1—3). (9 и 30 дни голодания — №№ 1, 2 и 25 день питания — № 3).

Рисунок 1

Рисунок 2

Рисунок 3

Настоящее исследование показало, что полное алиментарное голодание продолжительностью до 30 дней не вызывает нарушений хромосомного аппарата в лимфоцитах периферической крови людей. Отмеченная небольшая тенденция к увеличению частоты клеток с гиподиплоидными наборами у больных в отдаленные сроки голодания, можно думать, связана с уменьшением осмотической резистентности лимфоцитов в эти периоды голода, хотя прямые указания подобного рода, видимо, отсутствуют.

В связи с тем, что при голодании отмечается изменение соотношения узкоплазменных и широкоплазменных лимфоцитов в пользу узкоплазменных клеток (1, 11, 13), представлялось интересным исследовать количество клеток с ассоциациями акроцентрических хромосом. Не лишено вероятности, что клетки с ассоциациями и без них относятся к различным формам или клонам лимфоцитов (под воздействием ФГА в культуре крови, как уже указывалось, размножаются преимущественно лимфоциты).

Однако мы не обнаружили ни снижения количества клеток с ассоциациями, ни их повышения.

Следует подчеркнуть, что лимфоциты оказываются наиболее резистентными элементами белой крови при голодании по сравнению с другими видами лейкоцитов (1, 3, 7, 11, 13, 14). Поскольку в наших исследованиях нам были доступны лишь лимфоциты крови голодающих людей, остается открытым вопрос о влиянии голода на другие клеточные элементы организма человека. Этот вопрос требует самостоятельного изучения.

Выводы

1. Полное длительное алиментарное голодание в течение 9—30 дней, применяемое с лечебной целью, не вызвало повышения частоты клеток с разрывами хромосом.

2. При полном голодании в условиях и в сроки наших наблюдений не изменялось количество клеток с ассоциациями акроцентрических хромосом.

3. При длительных сроках голодания (25—28—30 дней) отмечалась тенденция к увеличению количества гиподиплоидных клеток, что, вероятно, может быть связано с уменьшением осмотической резистентности лимфоцитов в отдаленные сроки голодания.