Дорогой мистер Холмс - [43]

П. А. Минаков обратил внимание, что цвет крови в патолого-анатомических препаратах не вполне натуральный, а имеет кирпичный оттенок. Данный факт зависит, по исследованиям П. А. Минакова, от того, что под влиянием формалина и спирта гемоглобин переходит в нейтральный гематин, не растворимый в воде и спирте и дающий особый спектр, до того времени никем не наблюдавшийся. С этой же точки зрения П. А. Минаков объяснил ошибки, встречающиеся при изготовлении препаратов по способу Н. Ф. Мельникова-Разведенкова. Сделанное П. А. Минаковым открытие нейтрального гематина и его спектра составило важный новый факт в науке. Два года спустя Арнольд описал спектр нейтрального гематина, идентичный открытому П. А. Минаковым.

Для установления присутствия крови в следах на вещественных доказательствах методы делятся на ориентировочные и доказательные.

К наиболее часто используемым в настоящее время ориентировочным методам относят реакцию с реактивом Воскобойникова (с бензидином). Марлевый или ватный тампон смачивают смесью, состоящей из 1 процентного спиртового раствора основного бензидина и 5 процентного раствора перекиси водорода, и прикладывают к пятну, похожему на кровь. В случае наличия крови реактив на вате (марле) в месте соприкосновения приобретает синий цвет.

Для установления присутствия крови в следах на различных загрязненных предметах, больших по объему (ковры, половики и т. п.), особенно когда они располагаются в менее освещенных участках места происшествия, используют реакцию хемилюминесценции. В 1 л дистиллированной воды вносят 0,1 г люминола и 0,5 г гидрокарбоната натрия. Перед использованием к раствору добавляют пергидроль из расчета 10 мл на 1 л раствора. Подозрительные участки опрыскивают из пульверизатора. При положительном результате наблюдают вспышку голубого цвета в течение 65 с и образование белой пены.

Из доказательных методов кровяного происхождения следа для хорошо выраженных пятен применяют (по выбору) метод микроспектроскопии или (чаще всего) метод тонкослойной хроматографии на различных сорбентах, для чего кусочек из следа экстрагируют в физиологическом растворе, затем наносят подготовленный материал на сорбент в 5–7 мм от левого края пластинки, которую подсушивают при комнатной температуре. На образовавшееся пятно наносят вторую каплю, подсушивают – и так до израсходования 1–2 мкл вытяжки. Таким же образом на пластинку наносят свидетель (заведомо известную кровь). Пластинку помещают на 15 мин в сушильный шкаф при 100 градусах С, затем в чашку Петри наливают растворитель и пластинку кладут на подставку так, чтобы фитиль достиг дна чашки, накрывают крышкой и разделение ведут обычно 7–10 мин. Далее пластинку вынимают из камеры, высушивают и опрыскивают верхнюю треть раствором бензидина. Спустя 3–5 мин производят опрыскивание части пластинки раствором перекиси водорода. Образование на хроматограмме недалеко от фронта зоны синего цвета говорит о наличии гемоглобина, которое доказывают, сопоставляя эту зону с зоной свидетеля.

Старые, замытые пятна исследуют следующим образом: из пятна на предмете-носителе берут волокно или делают соскоб, помещают на предметное стекло и добавляют 2–3 капли концентрированной серной кислоты, накрывают предметным стеклом и исследуют довольно чувствительным методом микролюминесценции. Под действием серной кислоты красящее вещество крови образует глыбки гематопорфирина, имеющие яркое пурпурно-красное свечение. Такие участки исследуют с помощью микроспектральной насадки для установления спектра гематопорфирина.

Установив кровь, приступают к следующему этапу исследования – определению видовой принадлежности крови. К основным, постоянно используемым методам в практике относятся метод кольцепреципитации в жидкой среде и метод встречного иммуноэлектрофореза (электропреципитации).

Подготовка объектов для обоих методов практически идентична. Пятна крови на вещественных доказательствах и контрольные участки предметов-носителей экстрагируют стерильным физиологическим раствором при температуре +4–6 °C в течение 18–72 часов. При изучении труднорастворимых пятен крови время экстрагирования продлевают до 4–5 суток. Белки в пятнах из следов крови или другого объекта доводят до приблизительного содержания 1:1000 под контролем пробы Геллера с азотной кислотой.

При работе с пятнами малых размеров в реакции электропреципитации можно использовать ниточки из пятен крови размерами 0,1 × 0,1 см.

Постановка реакции преципитации в жидкой среде: в конические пробирки с соответствующими надписями помещают вытяжки из пятен крови, антиген и изотонический раствор натрия хлорида. В каждый объект исследования наслаивают преципитирующую сыворотку, чтобы отношение антигена и антитела составляло 1:10. Наблюдение ведут в течение часа, отмечая время появления преципитата. Положительным результатом реакции считается выпадение колец преципитата в пробирках с вытяжками из пятен крови и в пробирках с антигенами при отсутствии таковых в пробирках с вытяжками из предмета-носителя и физиологического раствора.

Техника проведения реакции электропреципитации заключается в следующем: расплавленный 1-процентный агаровый гель выливают на стеклянную пластинку, равномерно распределяя по всей площади, охлаждают, дают подсохнуть и уплотниться в течение 10–15 мин. Далее в геле пробивают стандартным пробойником по два параллельных ряда отверстий диаметром 0,3 см по трафарету, расположенному под пластинкой. Гель из отверстий удаляют препаровальной иглой. В отверстия одного ряда помещают преципитирующие сыворотки, в отверстия второго ряда – вытяжки из следов крови или ниточки с кровью. Таким же образом вводят контрольные участки предметов-носителей.