Болезни аквариумных рыб - [52]

Печень. Чтобы обнаружить паразитов, обитающих в печени, ее делят на небольшие кусочки, которые компрессируют и исследуют под лупой и затем при слабом увеличении микроскопа.

Желчный пузырь. Для обнаружения паразитов желчный пузырь вырезают, помещают на предметное стекло, разрезают ножницами, делают соскоб с внутренней оболочки стенки пузыря. Соскоб и сам желчный пузырь помещают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой и микроскопом. В желчном пузыре можно обнаружить простейших и сосальщиков.

Селезенка. Селезенку помещают между двумя стеклами, сжимают до прозрачности и исследуют под микроскопом.

Почки. Для обнаружения паразитов почки компрессируют и исследуют под микроскопом. В почках можно найти споровиков и яйца сосальщиков.

Плавательный пузырь. В случае необходимости соскоб с внутренней оболочки плавательного пузыря можно исследовать под микроскопом компрессорным методом.

Мочевой пузырь. Методика исследования сходна с исследованием желчного пузыря. В мочевом пузыре можно обнаружить сосальщиков, споровиков и инфузорий.

Половые органы. Для обнаружения паразитов железу по частям компрессируют между стеклами и просматривают под микроскопом.

В половых органах встречаются микроспоридии.

Желудочно-кишечный тракт. Пищевод, желудок и кишечник извлекают, освобождают от жира и печени, расправляют и вскрывают ножницами, начиная с пищевода. По ходу вскрытия обнаруженных крупных паразитов (ленточных и круглых червей, сосальщиков) извлекают и помещают в физиологический раствор. Содержимое из различных отделов желудочно-кишечного тракта исследуют компрессорным методом под микроскопом. Затем с помощью скальпеля делают глубокий соскоб со слизистой оболочки из нескольких мест и исследуют на наличие микроскопических паразитов (октомитус).

Мышцы. Чтобы обнаружить мелких паразитов, берут небольшие кусочки мышц из различных частей тела и исследуют компрессорным методом под лупой и под микроскопом при малом увеличении. В мышцах можно обнаружить споровика плистофору и его споры.

Головной и спинной мозг исследуют компрессорным методом. В этих органах можно обнаружить споровиков.

Методы окраски. Мазки крови па наличие кровепаразитов окрашивают азур-эозином по Романовскому — Гимза (0,8 г азура II, 3 г эозина, 250 мл химически чистого глицерина и 250 мл метилового спирта) или метиленовой синью по Машковскому (1 г метиленовой сини и 2,5 г буры растворяют в 100 мл горячей воды).

Готовую, имеющуюся в продаже краску Романовского перед окрашиванием разводят из расчета 2–3 капли на 1 мл нейтральной дистиллированной воды. Если готовая краска отсутствует, ее можно приготовить самим. Для этой цели 1 г азура II растворяют в 1 л прокипяченной дистиллированной воды (раствор № 1) и 1 г эозина — в 1 л воды (раствор № 2). Оба раствора хранят отдельно. Перед употреблением на 1 мл нейтральной дистиллированной воды прибавляют по две капли каждого раствора. Продолжительность окраски 20–40 минут. Эритроциты окрашиваются в красный или розовый цвет, протоплазма паразитов и лейкоцитов — в синий, ядра паразитов — в красный, а лейкоцитов — в фиолетовый.

Раствор метиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки в течение 30 секунд, затем промывают водой и дифференцируют в течение нескольких секунд 5—10 %-ным водным раствором танина. Эритроциты получаются красновато-фиолетовые, протоплазма простейших кровепаразитов — ярко-голубая, ядра лейкоцитов — фиолетовые.

Для изучения морфологии паразитических инфузорий применяют окраску железным гематоксилином по Гейденгайну (протрава 2–2,5 %-ным раствором сернокислых железо-аммиачных квасцов — 1–2 часа, окраска их 1 %-ным спиртовым раствором гематоксилина в течение нескольких часов и дифференциация 1 %-ным раствором 5—10 минут). Окрашивать инфузории можно также гематоксилином Делафильда или квасцовым кармином.

Паразитических жгутиконосцев окрашивают железным гематокслином или по Романовскому — Гимза.

Слизистых споровиков окрашивают 1 %-ным водным раствором метиленовой сини 30–60 минут, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96°-ный и абсолютный) и просветляют ксилолом.

Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течение нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде, затем помещают в краску (от 1 минуты до нескольких часов в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать, исследуя препараты под микроскопом. Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течение нескольких минут тщательно промывают от краски. Отмытых от краски паразитов осторожно сушат фильтровальной бумагой и проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96°-ный), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют гвоздичным маслом и ксилолом.

Цестод, так же как и трематод, можно окрашивать гематеином Майера (1 г гематеина растворяют в 1 л дистиллированной воды с последующим добавлением 0,2 г йодноватокислого натрия и 50 г калийных квасцов). Гематеин допускает как прогрессивное, так и регрессивное окрашивание (без дифференцировки или с ней). При прогрессивном способе красят только 30 минут, при регрессивном — в течение 24 часов. Во втором случае для дифференциации препарат обрабатывают в 1 %-ном солянокислом спирте под контролем микроскопа с последующим тщательным отмыванием краски в проточной воде в течение 20–30 минут.